Técnicas para analizar los polimorfismos del ADN extraído
En un principio la manera de
estudiar dichos marcadores se hizo por medio de la técnica llamada hibridación
con sondas o Southern blot.
El tipo de sondas que se utilizan
en esta técnica pueden ser de dos tipos:
Sondas Uni-locus (SLP): La técnica permite
detectar loci minisatélites únicos. son específicas para una región de un
determinado cromosoma. Se unen a secuencias largas de nucleótidos y presentan
mayor variabilidad que las sondas multi-locus. Como resultado se observan una o
dos bandas por individuo, según sea homocigoto o heterocigoto. El patrón de
bandas obtenido con estas sondas se denomina perfil unilocus de ADN o “DNA
profiling”. Se utiliza principalmente en investigaciones de paternidad porque
identifica loci minisatélites muy informativos.
Sondas Multi-locus (MLP): permiten
identificar simultáneamente muchas regiones hipervariables. Son sondas de 10 a
15 nucleótidos que se repiten múltiples veces y tras el revelado se observan de
10 a 20 bandas por persona. Este patrón de múltiples bandas es característico
de cada individuo, constituye algo así como su “huella dactilar de ADN” y se
conoce como huella genética multilocus o “DNA fingerprint”.
Las sondas multi y uni-locus
presentan una serie de ventajas e inconvenientes según:
Información aportada: las sondas
multi-locus tienen una mayor capacidad discriminativa al aparecer múltiples
bandas. No obstante, las uni-locus son más específicas ya que el fragmento de
ADN con el que hibridan es de mayor tamaño. Por consiguiente, para analizar 7 o
8 loci, se deberían utilizar 7 o 8 sondas uni-locus, mientras que con una sola
sonda multi-locus podría hibridar de un solo paso esas 7 o 8 regiones
hipervariables.
Cantidad y calidad del ADN: cuando se usan
sondas multi-locus se requiere aproximadamente un microgramo de ADN sin
degradar mientras que en el caso de las uni-locus se necesita menos de 100 ng y
este ADN no necesariamente debe estar en perfecto estado, siempre y cuando el
fragmento complementario a la sonda esté intacto.
Especificidad entre especies: las sondas
multi-locus permiten su uso sobre el ADN humano y de cientos de animales
superiores, mientras que las uni-locus son exclusivas de ADN humano.
Aunque las SLP han sido y son
bastante útiles en estudios de paternidad no puede decirse lo mismo de su
aplicación a la Criminalística ya que presenta una serie de inconvenientes como
son:
La cantidad de ADN que se necesita está
entre 20 y 100 ng, cantidad difícil de conseguir en casos de criminalística en
los que los indicios biológicos encontrados son mínimos.
En cuanto a la calidad del ADN, es muy
difícil encontrar en buen estado toda la cantidad de ADN que se necesita para
un análisis con sondas mono-locus.
El tiempo requerido para este tipo de
análisis es de dos o tres días, debido a la necesidad de tener que utilizar más
de una SLP.
El hecho de que se requieran
cantidades elevadas de ADN hace que normalmente, con el primer análisis se
consume la totalidad de la muestra, con lo que se dificulta un contraste de pruebas
o una posterior revisión del caso.
Todas estas limitaciones se
superaron tras la aparición de una técnica muy útil, la reacción en cadena de
la polimerasa (PCR: Polymerase Chain Reaction).
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